S1P/S1PR1通路调节LAMB3的表达对食管鳞癌 细胞迁移、黏附和转移的影响

该文主要探讨1-磷酸鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate, S1P)/1型1-磷酸鞘氨醇受体 (sphingosine 1-phosphate receptor 1, S1PR1)通路调节层黏连蛋白亚基β3(laminin subunit beta 3, LAMB3)的表达对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)细胞增殖、迁移、 黏附及转移的影响。使用GEO数据库分析LAMB3在ESCC癌组织与癌旁正常组织中的表达差异 情况; 用Western blot检测人食管上皮细胞HEEC及人食管鳞癌Eca109、TE-1、KYSE-150细胞中 LAMB3的表达量; 用S1P处理TE-1细胞, 或在Eca109细胞中敲低或过表达S1PR1, 采用Western blot 检测LAMB3的表达情况; S1PR1-EGFP过表达载体和LAMB3小干扰RNA(siRNA)共转染Eca109细 胞, 采用划痕实验检测迁移能力; 采用LAMB3 siRNA或LAMB3短发夹RNA(shRNA)下调ESCC细 胞LAMB3的表达, 过表达LAMB3的慢病毒上调ESCC细胞LAMB3的表达, 通过CCK8法、划痕实 验、细胞–基质黏附实验分别检测ESCC细胞的增殖、迁移和黏附能力, Western blot检测上皮–间质 转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关蛋白及基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9, MMP9)的表达情况; 裸鼠尾静脉注射LAMB3 shRNA敲低的Eca109细胞, 观察其转移能力及生存 期。结果显示, LAMB3在ESCC癌组织及ESCC细胞中的表达均高于癌旁正常组织及正常食管上 皮细胞; S1P作用后的TE-1细胞LAMB3表达水平增高; 在Eca109细胞中敲低S1PR1, LAMB3表达下 调; 在Eca109细胞中过表达S1PR1, LAMB3表达上调, 促进细胞迁移, 并且干扰LAMB3表达可抑制 上述作用; 敲低LAMB3的表达, Eca109、TE-1细胞增殖无显著变化, 而迁移、黏附受到明显抑制, 过表达LAMB3后, Eca109细胞增殖无显著变化, 而迁移、黏附增强; LAMB3 shRNA敲低的Eca109 细胞EMT过程被抑制, MMP9表达降低, 过表达LAMB3则出现相反的效应; 与NC shRNA组相比, 注 射LAMB3 shRNA敲低的Eca109细胞的裸鼠生存期明显延长, 肿瘤体内转移灶减少。该研究得出, LAMB3在ESCC细胞及组织中表达上调, S1P/S1PR1通路能诱导LAMB3的表达, 促进ESCC细胞的 体外迁移、黏附和体内转移。