一种新的皮肌炎患者外周血Treg淋巴细胞亚群的多色分析方法的建立

为探索建立新的皮肌炎患者外周血Treg淋巴细胞亚群分析方法, 利用流式细胞仪设计并优化针对Treg细胞的15色流式染色方案。该文收集了皮肌炎患者和健康志愿者的外周血, 用密度梯度离心法分离获得外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)。该研究分

别对抗体浓度、染色时间、孵育温度、是否避光、荧光素放置时间及上机收样电压等进行优化,最终完成单样品15色高通量流式检测, 并结合FlowJo软件对目标细胞Treg亚群进行高阶数据分析。结果表明, (1) BLANK十字架法结合染色指数法可确立方案(Panel)的最适电压值; (2) 抗体TIGIT BV421、HLA-DR PE、CD127 BV605、CD103 R718、CD25 PE-Cy7滴定后的最优标记量分别为1.25、1.25、3、2.5、5 μL/test(100 μL染色体积/test); (3) 多色流式抗体染色的最佳条件是4 °C、避光条件下孵育30 min; (4) 样本制备后应尽快检测, 放置时间不超过24 h。该研究中建立的15色Panel可成功分析人PBMC样本Treg细胞亚群及相关活化分子的表达情况。此方法可应用于以皮肌炎为代表

的伴有Treg细胞缺陷的外周血Treg淋巴细胞亚群的分析。