CRISPR/Cas9介导RSAD2基因敲除的ST细胞模型建立

李娟^1,2 杜柳阳¹ 顾金燕² 曹瑞兵¹*

(¹南京农业大学动物医学院, 南京 210095; ²浙江大学动物医学中心, 农业农村部动物病毒学重点实验室, 杭州 310058)

摘要 :

RSAD2是一种多功能干扰素(interferon, IFN)诱导蛋白。该研究利用CRISPR/Cas9系统建立了RSAD2基因敲除的猪睾丸细胞系(swine testicular cell, ST cell)模型。应用在线工具设计了针对RSAD2基因的4条sgRNA, 并将其克隆至pX459载体。经嘌呤霉素初步筛选、Western blot检测确定了RSAD2-sgRNA-4具有最优敲除效果。该实验通过单克隆化转染RSAD2-sgRNA-4的ST细胞后成功获得RSAD2基因敲除ST细胞模型。双荧光素酶活性实验及实时荧光定量PCR实验(RT-qPCR) 证明, RSAD2基因敲除对ST细胞的IFN-β、IRF3、NF-κB基因启动子活性及mRNA水平没有明显影响。该实验利用CRISPR/Cas9系统构建并获得稳定敲除RSAD2基因的ST细胞模型, 为RSAD2功能研究提供有力工具。