稳定表达hACE2的293T细胞系的建立及功能分析

该研究旨在利用hACE2真核表达载体, 通过电转法获得具有新型冠状病毒易感性的 稳定表达hACE2的293T细胞株。将线性表达质粒pCMV-hACE2电转至293T细胞, 经潮霉素B筛选 后, 利用间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、Western blot、流式分析法鉴定hACE2的表达, S-RBD蛋白 和SARS-CoV-2假病毒分析细胞功能活性。利用250 μg/mL潮霉素B筛选获得了稳定高表达hACE2 的细胞系293T-hACE2-D4。在该细胞中, RT-PCR检测到了大量hACE2基因的mRNA, Western blot、 间接免疫荧光和流式分析法检测细胞表面hACE2蛋白表达情况(阳性细胞率为86.86%)。功能分析 中, 293T-hACE2-27-D4细胞不仅能够与SARS-Cov-2 S-RBD蛋白相结合(结合率达84.26%), 并且能 够成功感染新型冠状病毒假病毒。该研究构建的稳定表达hACE2的293T细胞不仅能与S-RBD蛋白 结合, 还对新冠假病毒具有易感性, 是探究病毒感染机制的有利工具。