大质粒转染人源心室肌Ac16细胞条件探究
李亚欢 范承昊 向晨莹 廉虹*
(中国医学科学院, 北京协和医学院, 国家心血管疾病中心, 阜外医院, 动物实验中心, 心血管植入材料临床前研究评价北京市重点实验室, 北京 102300)
摘要 :
该研究主要针对大质粒转染人源心室肌Ac16细胞的方式及最适条件进行摸索。采用 人源心室肌Ac16细胞作为研究模型, 分别用Lip3000转染、核酸脂质体(Hieff Trans™ Liposomal)转染 和慢病毒转染三种方法将外源大质粒pLenti-CasRx-EGFP导入Ac16细胞中, 通过统计表达绿色荧光 蛋白的阳性细胞比例, 分析外源基因的转染效率, 探索大质粒pLenti-CasRx-EGFP的最佳转染方式和 转染条件。结果表明, Lip3000转染Ac16细胞的最适转染条件为: 质粒与Lip3000的比例为1:2; 核酸 脂质体转染Ac16细胞的最适条件为: 质粒与脂质体的比例为1:3; 慢病毒感染Ac16细胞的最适MOI值 为200; 通过比较三种转染方式的转染效率发现慢病毒的转染效率最高。最后得出大于10 Kb的大型 质粒(pLenti-CasRx-EGFP)转染人源心室肌Ac16细胞最适合的方式是利用慢病毒转染, 最佳MOI值 为200。
中文版
英文版