组合添加雌激素和催乳素对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白合成的影响

为了探讨组合添加雌激素和催乳素对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)酪蛋白合成的影响 及作用机制, 以课题组前期筛选出的最佳雌激素和催乳素浓度为基础, 开展组合添加试验。雌激 素和催乳素的添加总量为300 ng/mL, 根据二者的添加比例分为试验I组(对照组, 不添加雌激素和 催乳素)、试验II组(雌激素׃催乳素=5׃1)、试验III组(雌激素׃催乳素=2׃1)和试验IV组(雌激素׃催乳 素=1׃2)。采用MTT法检测细胞增殖情况; qRT-PCR法检测酪蛋白合成、mTOR信号通路和JAK2- STAT5信号通路相关基因表达情况; 蛋白印迹法检测细胞中α酪蛋白和β酪蛋白水平。结果显示, 与 对照组相比, 试验II、III、IV组均显著增加了BMECs的增殖率, 提高了BMECs中CSN1S1、CSN3、 AMPK、PI3K、AKT、mTOR、eIF4E、JAK2、STAT5、ERβ和PRLR的基因表达水平(P<0.05); 试验 III组和试验IV组显著提高了BMECs中CSN2的基因表达水平(P<0.05)。与对照组相比, 试验II组和 IV组显著增加了BMECs的α酪蛋白和β酪蛋白表达量(P<0.05), 其中α酪蛋白的表达量分别提高了 22.7%和38.6%, β酪蛋白的表达量分别提高了62.9%和102.9%。试验III组β酪蛋白的表达量显著高 于对照组(P<0.05), 而α酪蛋白表达量与对照组无显著差异。综合细胞增殖和酪蛋白表达的结果, 组合添加100 ng/mL雌激素和200 ng/mL催乳素的试验IV组对BMECs酪蛋白合成的促进效果最佳