CRISPR-Cas13a系统在斑马鱼基因表达下调中的应用研究

该研究建立了基于CRISPR-Cas13a系统的斑马鱼基因表达下调体系, 并对其效果和特异性进行了检测分析。以斑马鱼报告基因egfp和内源性基因ta、fabp11a为研究对象, 设计并合成靶向靶标基因的crRNA及其突变体, 构建Cas13a及其突变体(dCas13a)的表达质粒, 在体外合成Cas13a-mRNA和dCas13a-mRNA(dCas13a), 分别与各crRNA共注射至野生型AB和egfp转基因斑马鱼胚胎中, 通过表型观察及qRT-PCR技术验证靶标基因表达下调的情况。结果表明, Cas13a-mRNA分别与egfp-crRNA、ta-crRNA和fabp11a-crRNA共注射后, 可相应导致斑马鱼体内绿色荧光蛋白减少、尾部发育缺陷以及眼睛发育缺陷等表型; qRT-PCR结果显示, 注射Cas13a-mRNA和各靶基因crRNA后egfp、ta和fabp11a表达均下调; 而用含有序列突变的Cas13a或者crRNA注射后, CRISPRCas13a系统无法下调靶基因表达。该研究表明CRISPR-Cas13a系统可有效下调斑马鱼体内基因的表达。