基于II型肺泡上皮细胞RNAscope多通道荧光检测技术在类器官研究中的应用

孙剑会^1,2 刘迪^1,2 张华才^1,2 张安强^1,2 米俊伟^1,2 蒋建新1,2* 曾灵^1,2*

(¹陆军军医大学大坪医院战创伤医学中心, 重庆 400042; ²创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室, 重庆 400042)

摘要 :

该文探讨了RNAscope多通道荧光检测技术在类器官中的应用并建立了相应的实验体系, 旨在为类器官的研究提供更多的技术与方法。该研究采用磁珠分选方法从大鼠肺组织中分选II型肺泡上皮细胞(alveolar epithelial type II cells, AEC2s), 并采用免疫荧光鉴定AEC2s细胞的纯度, 对分离的AEC2s细胞进行肺类器官培养, 培养第15天时采用倒置显微镜观察肺类器官的生长规律, HE染色观察肺类器官的形态结构特征, RNAscope多通道荧光检测技术检测肺类器官原位单细胞中Sftpc、Aqp5、krt5、ki67等四个RNA的基因表达情况。结果表明, RNAscope多通道荧光检测技术在类器官应用中具有可行性, 该技术能实现类器官单细胞水平同时分析多个RNA的表达水平, 在获得单细胞中拷贝RNA表达数据的同时提供完整的组织形态学信息, 提高对疾病与标志物之间复杂的生物学相关性认识, 因此, RNAscope多通道荧光检测技术为类器官在单细胞水平的研究开辟了新的途径。