RPL11基因稳定敲低细胞系的构建及验证
刘伟1 郭佩东1 贾楠楠2 孙英杰2 谭磊2 刘炜玮2 仇旭升2 廖瑛2 宋翠萍2 丁铲1,2* 孟春春2*
(1福建农林大学动物科学学院(蜂学学院), 福州 350002; 2中国农业科学院上海兽医研究所, 上海 200241)
摘要 :
针对RPL11基因设计三条不同的shRNA, 并分别克隆至带绿色荧光标签的pRNATU6.1载体, 以用于构建RPL11稳定敲减的细胞系。将重组质粒转染至HeLa细胞中并加入G418进行筛选, 随后通过有限稀释法将阳性细胞亚克隆纯化。将扩大培养的亚克隆细胞进行Western blot和qPCR实验验证获得RPL11基因稳定敲低的细胞株。利用CCK-8细胞活力检测试剂盒和Puromycin标记法测定RPL11基因稳定敲低细胞系的生长活力和新生蛋白合成能力, 结果表明, RPL11基因稳定敲低后并不影响细胞的活力和新生蛋白合成能力, 该细胞系为后续研究RPL11的非核糖体功能奠定了基础。
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