TNF-α小分子抑制剂C87的纳米药物制备及其体内外活性研究
孔鑫垚 熊青青 马莉 姜珊 吕梦楠 马润芝 张诗悦 孙露 王彤 许元富*
该研究首先制备并表征包载TNF-α小分子抑制剂C87的纳米粒子, 进而评价其在L929细胞和小鼠自身免疫性肝损伤模型中抑制TNF-α细胞毒性的作用。采用纳米沉淀法制备载C87的纳米粒子(C87 NP), 并对其理化性质及体外释放行为进行表征; 在L929细胞中用MTT法分析C87 NP拮抗TNF-α细胞毒作用的效果; 经尾静脉注射刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠发生自身免疫性肝损伤, 采用C87 NP预给药方式, 防治小鼠自身免疫性肝损伤; 使用LEGENDplex™分析小鼠血清中13种细胞因子的表达水平; 流式细胞术分析肝和脾中T细胞及亚群、NK细胞等的分布、比例和数量。制备出的C87 NP具有较高(34.4%)的载药量, 且稳定性好, 其包封率为48.1%, C87 NP平均粒径为82.57 nm, 多分散系数为0.115, 呈电中性, 透射电镜结果显示其为球形结构; 该纳米粒子可在体外持续缓慢释放C87, 持续时间不少于8 h; C87 NP可以在体外抑制TNF-α对L929细胞的杀伤能力(IC50=9.13 μmol/L), 并呈浓度依赖性; 动物实验结果显示, C87 NP治疗组小鼠的存活率为66.7%, 进一步的生化和病理分析结果表明, ConA小鼠尾静脉给药12 h后, C87 NP预防性给药能显著降低血清中ALT、AST与部分细胞因子的水平(P<0.01), 减轻肝损伤, 减少CD4+T、CD8+T、NK细胞等对肝脾的浸润(P<0.01), 提高脾脏Treg细胞比例(P<0.05)。该研究成功制备出纳米药物C87 NP, 且C87 NP在体内外具有良好的抑制TNF-α细胞毒性的作用, 这为小分子药物C87今后在临床上的应用奠定了基础。
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