双香豆素在HBx介导的肝癌细胞生长增殖中的作用及其机制研究

HCC是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一, 其中50%以上与乙型肝炎病毒(HBV)感染相关, 且乙肝相关性肝癌患者术后复发率明显高于未合并乙肝患者。而病毒蛋白HBx是促进乙肝相关性肝癌进展的主要因素。因此, 寻找能够有效抑制HBx促癌作用的小分子化合物, 减缓乙肝相关性肝癌的疾病进展, 对于延长患者生存期具有重要意义。该研究初步探讨了小分子化合物双香豆素在HBx介导的肝癌细胞生长增殖中的作用及机制。首先, 利用MTT实验确定了双香豆素的使用浓度。其次, 采用生长曲线、CCK-8和EdU实验检测了双香豆素对HBV稳定表达细胞(HepG2.2.15)、HBV感染细胞(HepG2-NTCP)、HBx过表达细胞(HepG2-HBx)、HBV瞬时表达细胞(HepG2 HBV-WT)及肝癌细胞(HepG2)生长增殖能力的影响; 同时利用平板集落形成实验检测了细胞集落形成能力。然后, 利用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测了细胞生长增殖相关分子β-连环蛋白(β-catenin)及下游靶标c-Myc和细胞周期蛋白A2(Cyclin A2)的mRNA和蛋白水平。最后, 检测了双香豆素发挥抑癌作用时对HBx的依赖性。结果显示, 双香豆素呈浓度依赖地抑制HepG2.2.15细胞及HBV感染的HepG2-NTCP细胞的生长增殖及集落形成; 同时, 双香豆素显著抑制HBx过表达细胞(HepG2-HBx)及HBV瞬时表达细胞(HepG2 HBV-WT)的生长增殖。进一步机制解析发现, 双香豆素显著下调β-catenin、c-Myc和Cyclin A2的水平进而抑制细胞生长增殖。最后, 该研究证实了双香豆素对乙肝相关性肝癌生长增殖的抑制作用依赖于HBx。总之, 该文发现双香豆素可有效抑制乙肝相关性肝癌生长增殖且此作用依赖于HBx。