一种细胞外囊泡的流式检测方案的探索与建立

该研究旨在探索细胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs)分析的标准化流程, 建立一种 高效的EVs检测方法, 为EVs功能及临床转化研究提供技术支撑。实验采用经典的超速离心法分离 EVs, 借助已知直径的聚苯乙烯微球设定并优化流式检测EVs的参数, 联合应用散色光信号及荧光 信号对EVs进行双参数分析鉴定, 最后通过电镜观察及蛋白质免疫印迹(Western blot, WB)对鉴定结 果进行验证。结果显示, 参照纳米微球设定的条件可清楚地将100 nm颗粒信号与噪音信号分离, 且 微球稀释的梯度和检测到的浓度之间呈线性相关, 可以对EVs进行定量分析; 荧光染色结果显示, EVs呈CFSE(5, 6-Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester, 蛋白结合染料)及FM1-43(fixable analog of FM™ 1-43 membrane stain, 亲脂性染料)双阳性, 占比约3%; 电镜验证其形态及直径与预 期相一致。该研究通过优化流式方案及双荧光参数分析鉴定探索了EVs流式检测的标准化流程, 建 立了高效、准确的EVs流式检测方法。