氧化低密度脂蛋白通过Wnt5a/PKCδ信号通路诱导大鼠肝星状细胞自噬

该文旨在研究氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)自噬的影响及 机制, 探讨非酒精性脂肪肝炎的发病机理。体外培养的HSC-T6细胞以不同质量浓度(0、10、20、 40、60 μg/mL)的ox-LDL分别处理不同时间(0、3、6、12、24 h)后, 用Western blot检测LC3 II、Beclin1、p62的含量。不同质量浓度(0、10、20、40、60 μg/mL)的ox-LDL处理HSC-T6细胞12 h后, Western blot检测Wnt5a、p-PKCδ、p-STAT3的含量。将HSC-T6细胞分为对照组(Control)、ox-LDL 组、ox-LDL+si-NC组和ox-LDL+si-Wnt5a组, 经相应处理后用Western blot、qRT-PCR分别检测LC3 II、Beclin1、p62、p-PKCδ、p-STAT3的蛋白和mRNA含量变化; 免疫荧光检测LC3 II的变化; 油红O 染色观察HSC-T6脂滴含量变化; 比色法检测各组细胞培养上清中羟脯氨酸(Hyp)含量; ELISA 检测 细胞培养上清中透明质酸(HA)和层黏连蛋白(LN)含量。PKCδ抑制剂Rottlerin预处理细胞: 将HSCT6细胞分为对照组(Control)、ox-LDL组、ox-LDL+DMSO组和ox-LDL+Rottlerin组, 检测方法与敲 低Wnt5a一致。经ox-LDL处理后, HSC-T6细胞中LC3 II、Beclin1含量增加(P<0.05), p62含量减少 (P<0.01), 且在ox-LDL质量浓度为20 μg/mL、作用12 h时达到峰值。ox-LDL质量浓度为20 μg/mL、 作用12 h时, HSC-T6细胞中Wnt5a、p-PKCδ、p-STAT3蛋白表达显著升高(P<0.01)。敲低Wnt5a后, HSC-T6细胞中Wnt5a、LC3 II、Beclin1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.001), p62蛋白表达增 多(P<0.01), p-PKCδ、p-STAT3蛋白表达减少(P<0.05), 细胞内LC3 II点状聚集减少, 脂滴含量减少, 细胞培养上清中Hyp、HA、LN含量也减少(P<0.05)。抑制PKCδ后, 结果与敲低Wnt5a一致。oxLDL可通过增强Wnt5a/PKCδ通路诱导HSC-T6细胞自噬。