B(a)P暴露干扰细胞周期调控蛋白影响孕早期小鼠卵巢黄体功能

该研究旨在探讨苯并(a)芘[Benzo(a)pyrene, B(a)P]对孕早期小鼠卵巢黄体功能的影响及机制。体内模型: 将昆明小鼠每晚按雌雄3:1的比例合笼, 次晨查得阴栓记为孕第1天(d1); 将其随机分为对照组和B(a)P处理组, 每日早晨称重后以0.1 mL/10 g动物体质量灌胃给予0.2 mg/(kg·d)的B(a)P, 对照组灌胃等体积的玉米油, 收取d4、d7小鼠卵巢组织。体外模型: 培养小鼠卵巢颗粒细胞KK-1, 将其分为对照组(0.1% DMSO)、HCG组(1.0 IU/mL HCG)、HCG+BPDE(1.0 IU/mL HCG和0.5 μmol/L BPDE)联合处理组, 处理细胞24 h后进行后续检测。ELISA检测小鼠血清雌激素(E2)、孕激素(P4)水平; qRT-PCR检测体内外卵巢雌、孕激素合成限速酶3β-HSD、17β-HSD和P450SCC的mRNA水平; 免疫组化检测卵巢组织切片中Ki67、PCNA的表达, CCK-8检测KK-1细胞增殖情况; Western blot、免疫组化和免疫荧光检测周期相关蛋白CyclinA1、CDK2、CDK4、CyclinB1以及GAS1的表达情况。透射电镜和Mitotracker探针观察线粒体形态。与对照组相比, B(a)P暴露导致孕早期小鼠血清中E2、P4水平明显降低; 同时, 卵巢雌、孕激素合成限速酶3β-HSD、17β-HSD和P450SCC mRNA水平下调; CCK-8结果显示, BPDE暴露导致细胞活力下降; 体内B(a)P暴露导致卵巢黄体中Ki67、PCNA表达下调; Western blot、免疫组化和免疫荧光结果显示, B(a)P或BPDE暴露下调细胞周期相关因子CyclinA1、CDK2、CDK4、CyclinB1及GAS1水平; 电镜和免疫荧光结果显示, BPDE暴露导致线粒体形态异常。B(a)P及其代谢物BPDE干扰细胞周期调控, 影响线粒体功能, 进而导致孕早期小鼠卵巢黄体功能异常。