hiPSCs分化为胰岛素分泌细胞过程中microRNA的动态表达研究 

该文探讨了人诱导多能干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞过程中microRNA的动态表 达变化情况。利用慢病毒技术构建可报告insulin基因表达的hiPSCs细胞株(INS-promoter-hiPSCs), 通过“五步法”方案将其诱导为胰岛素分泌细胞; 分别收集hiPSCs、内胚层细胞、原肠管细胞、胰 腺祖细胞和胰岛素分泌细胞, 并提取细胞总RNA; 利用S-Poly(T) plus技术检测多种microRNA在胰 岛β细胞分化过程中的动态表达水平。结果显示, 成功构建的INS-hiPSCs细胞株可报告胰岛素基因 表达, 在体外可将其诱导分化为胰岛素分泌细胞, 流式分选获得约16% EGFP表达阳性的纯胰岛素 分泌细胞, 分选好的细胞可用于下游实验; 进一步验证分化过程中各组细胞的miRNAs表达, miR495-3p、miR-199-5p、miR369-5p的PCR扩增循环阈值(Ct值)大于35, 说明其表达水平极低; miR-1523p、miR-133a-3p、miR-181c-5p、miR-410-3p、miR-487a-3p、miR-338-3p、miR-30-5p、miR-6553p、miR-26a-3p、miR-182-5p、miR210-3p、miR-342-3p和miR-589-5p在分化过程中持续上调表达; miR-302a-3p、miR-222-3p和miR-802的表达水平在分化过程中显著下调。因此, 诱导分化稳定表 达的INS-promoter-hiPSCs细胞株可以成功实现对胰岛素阳性细胞的分选及富集, 为后续筛选调控 干细胞分化的miRNA提供了有力保障; 并进一步验证分析了19种可能参与调控胰岛β细胞胚胎发 育的micorRNA的动态表达变化, 为多能干细胞定向分化为胰岛细胞的机制研究提供新线索, 为体 外获得功能性的胰岛β细胞奠定相关理论基础。