lncRNA LINC00958对小细胞肺癌细胞阿帕替尼耐药性的影响

研究lncRNA LINC00958对小细胞肺癌细胞的阿帕替尼(AP)耐药性的影响及其作用机制。采用逐步增加阿帕替尼浓度法建立小细胞肺癌阿帕替尼耐药细胞株H446/AP, 分别用2.5 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L的阿帕替尼处理H446、H446/AP细胞, 并检测阿帕替尼对其增殖抑制率的影响。然后将H446/AP细胞分为AP+si-NC组(转染LINC00958干扰载体阴性对照+5 μmol/L阿帕替尼)、AP+si-LINC00958组(转染LINC00958干扰载体+5 μmol/L阿帕替尼)、AP+miRNC组(转染miR-490-3p模拟物阴性对照+5 μmol/L阿帕替尼)、AP+miR-490-3p组(转染miR-490-3p模拟物+5 μmol/L阿帕替尼)、AP+si-LINC00958+anti-miR-NC组(共转染LINC00958干扰载体和miR-490-3p抑制载体阴性对照+5 μmol/L阿帕替尼)、AP+si-LINC00958+anti-miR-490-3p组(共转染LINC00958干扰载体和miR-490-3p抑制载体+5 μmol/L阿帕替尼)。用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LINC00958和miR-490-3p的表达水平; CCK-8检测细胞增殖抑制率; Western blot检测蛋白表达水平; 细胞划痕实验检测细胞划痕愈合率; Transwell检测细胞迁移和侵袭; 双荧光素酶报告实验检测LINC00958和miR-490-3p的靶向关系。结果显示, 耐药和非耐药小细胞肺癌组织中LINC00958高表达, miR-490-3p低表达(P<0.05); 相较于H446细胞, H446/AP细胞中LINC00958表达水平显著升高, miR-490-3p表达水平显著降低(P<0.05)。不同浓度阿帕替尼处理后, H446/AP相较于H446细胞增殖抑制率显著降低, 半数抑制浓度(IC50)显著升高(P<0.05)。抑制LINC00958表达联合阿帕替尼和miR-490-3p过表达联合阿帕替尼, H446/AP细胞中CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低, H446/AP细胞中p21表达水平显著升高, H446/AP细胞抑制率显著升高, 划痕愈合率降低, H446/AP细胞迁移和侵袭数量显著降低(P<0.05)。LINC00958靶向调控miR-490-3p, 干扰miR-490-3p表达逆转了抑制LINC00958表达对H446/AP细胞阿帕替尼耐药性的抑制作用。因此, 抑制LINC00958表达联合阿帕替尼可抑制H446/AP细胞增殖、迁移和侵袭, 降低小细胞肺癌对阿帕替尼的耐药性, 其机制可能与miR-490-3p表达有关。