RANBP9调控结直肠癌细胞凋亡的信号通路分析

RANBP9是RAS超家族成员RAN的一种结合蛋白, 参与多种肿瘤的发生发展。为探索它对结直肠癌细胞凋亡的调控作用, 该研究利用慢病毒感染结直肠癌HCT116、HT29细胞的方法,建立RANBP9-shRNA稳转细胞系, 经氟尿嘧啶诱导凋亡后利用流式细胞仪和caspase-2酶活力实验检测细胞凋亡; 抽提实验组和对照组HCT116细胞总RNA, 经质检合格后进行基因表达谱芯片实验,筛选出RANBP9敲减前后结直肠癌细胞的差异表达基因并进行定量PCR验证, 基于Gene Ontology数据库进行分子功能注释, 基于Ingenuity Pathway Analysis数据库进行通路分析。流式细胞分析显示, 在HCT116和HT29细胞中RANBP9-shRNA均促进氟尿嘧啶诱导的细胞凋亡; 基因芯片数据分析得到差异表达mRNAs 857个(|Fold Change|>1.5且FDR<0.05), 其中上调表达677个, 下调表达180个,涉及的分子功能主要包括γ-谷氨酰转移酶活性、钙离子结合、胰岛素受体结合、病毒受体活性、GTP酶活性、细胞外基质结合、β-连环蛋白结合、SMAD结合、转录调节、AMP活化蛋白激酶活性、蛋白质转运蛋白活性、细胞骨架结合等, 其显著参与的信号通路主要涉及癌症的TGF-β、BMP、IL-8和RhoA等。实时定量PCR证实上述通路中的SMAD3、SMAD7、BMP6、BMP7、CXCL8、RAPGEF6的mRNA表达水平在RANBP9-shRNA组中显著高于对照组。综上, RANBP9可能通过多个信号通路来调控结直肠癌细胞的凋亡, 该研究为阐明其中的分子机制提供了新的思路。