IKBKB基因c.1183T>C点突变小鼠的建立及基本表型分析
冯苠璇1,2 周丽娜1,2 秦涛2,3 赵晓东1,2 贾彦军1,2*
1重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所, 儿童感染免疫重庆市重点实验室, 重庆 400014; 2儿童发育疾病研究教育部重点实验室; 国家儿童健康与疾病临床医学研究中心(重庆); 儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地儿科学重庆市重点实验室, 重庆 400014; 3重庆医科大学附属儿童医院感染科, 重庆 400014
摘要 :
该研究主要为探究IKBKB基因c.1183T>C位点突变对人免疫器官淋巴细胞的影响。采用CRISPR/Cas9技术构建相应点突变模式小鼠, 并提取小鼠(C57BL/6J)基因组DNA进行PCR及一代测序、鉴定及扩繁, 使用密度梯度离心法提取小鼠脾脏及胸腺淋巴细胞, 采用Real-time PCR及Western blot检测淋巴细胞中IKKs家族各亚基(IKKα、IKKβ和IKKγ) mRNA及蛋白的表达, 并使用分子运行模式(molecular operating environment, MOE)软件分析蛋白PDB结构及建立3D模型。小鼠基因测序结果表明成功构建点突变稳定基因型小鼠; 与野生型小鼠相比, 纯合突变小鼠IKBKB mRNA表达无明显变化, 而IKKβ蛋白表达明显降低; 蛋白结构分析结果提示, 突变后的IKKβ蛋白空间构型明显改变。研究初步表明, IKBKB Y397H突变导致小鼠脾脏及胸腺的淋巴细胞中IKKβ蛋白明显下降, 可能是由于突变导致蛋白结构发生改变而使其稳定性降低, 这为进一步探究该位点突变对免疫细胞稳态调节及其致病机制提供了新思路及实验基础。
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