稳定表达小鼠CD40L的NIH3T3细胞系的建立及其在B细胞培养和激活中的应用
郎巧利 何琦琳 黄楠 余琳 杨希*
重庆市畜牧科学院, 农业部养猪科学重点实验室, 养猪科学重庆市市级重点实验室, 重庆市医用动物资源的开发与利用工程计算研究中心, 重庆 402460
摘要 :
该研究构建小鼠CD40L真核表达重组质粒pcDNA3.1-mCD40L, 通过电转法将重组质粒转至NIH3T3细胞中。利用G418对转染后细胞进行压力筛选, 获得稳定转染细胞株。提取稳定转染细胞株RNA, 通过RT-PCR法检测Neo基因的mRNA表达情况。分离稳定转染细胞上清, 利用ELISA法检测小鼠CD40L蛋白水平的表达情况。RT-PCR结果显示, Neo基因能够在稳定转染细胞中表达, ELISA结果显示, 获得的稳定转染细胞株NIH3T3-mCD40L细胞上清中CD40L的表达量高达1.286 ng/mL。进一步活性研究表明, 该细胞系能够在体外与IL-2和IL-21共同作用培养B细胞至14天, 并刺激B细胞产生特异性抗体。该细胞系的成功构建, 为利用体外B细胞分离培养和活化法分离特异性单克隆抗体奠定了良好的基础。
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