颗粒蛋白前体抑制钙盐诱导主动脉瓣膜间质细胞成骨分化
皇改改 施琼 安利钦 范梦恬 朱梦颖 翁亚光*
重庆医科大学检验医学院, 临床检验诊断学教育部重点实验室, 重庆 400016
摘要 :
该文主要研究颗粒蛋白前体(progranulin, PGRN)对猪主动脉瓣膜间质细胞(valve interstitial cells, VICs)成骨分化的影响及机制, 为钙化性主动脉瓣膜病(calcific aortic valve disease,CAVD)的早期干预及治疗提供理论依据。采用免疫组化检测正常组和CAVD组中Runx2、OPN的表达, Western blot检测PGRN、纤维化指标α-SMA、钙化指标(Runx2、OPN)的表达以及AKT磷酸化水平。采用胶原酶连续消化法分离VICs, 并用免疫荧光染色行表型鉴定。体外实验加入人PGRN重组蛋白, 采用ALP染色、茜素红S染色、qPCR和Western blot检测细胞早期及晚期成骨分化能力以及AKT的磷酸化水平; 并加入AKT的激活剂SC-79进行反向验证。结果表明, 与正常组织相比, CAVD瓣膜组织中PGRN明显降低, α-SMA、Runx2、OPN和p-AKT在CAVD组中表达均明显高于正常组。成功分离出原代VICs, α-SMA和vimentin阳性, vWF阴性。PGRN可使VICs的ALP活性降低、钙盐沉积明显减少; PGRN可下调纤维化/钙化指标, 且AKT的磷酸化水平降低; SC-79可减弱PGRN对纤维化/钙化指标的下调作用。提示PGRN能够抑制静止的VIC向肌纤维母细胞样的活化VIC乃至成骨样VIC进行转化, AKT信号通路可能在该过程中发挥重要作用。
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