Sh-PLCε提高IL-2治疗肾癌疗效的研究

杨锦潇¹ 段李梅¹ 范佳鑫¹ 李婷¹ 范砚茹¹ 袁鸿玲¹ 吴小侯² 罗春丽^1*

¹重庆医科大学检验医学院, 临床检验诊断学教育部重点实验室, 重庆 400016; ²重庆医科大学附属第一医院泌尿外科, 重庆 400016

摘要 :

该实验旨在探讨磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Cε(phospholipase C ε, PLCε)是否在白介素 2(interleukin 2, IL-2)治疗肾癌的过程中发挥一定的作用。采用sh-PLCε慢病毒转染肾癌细胞株786-o。 MTT法检测IL-2处理肾癌细胞最适浓度, 使用最适浓度IL-2处理细胞。流式细胞术检测细胞凋亡。 DAPI染色观察细胞中凋亡小体。q-PCR、Western blot检测Fas/FasL以及Fas下游相关分子在基因水平以及蛋白水平的表达变化。将肿瘤细胞与淋巴细胞进行共培养, 流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果显示, 敲低PLCε后, Fas/FasL表达降低, 而IL-2处理后, 会逆转这种效果。检测Fas下游相关通路后发现, IL-2处理阴性对照(negative control, NC)组后, Fas下游凋亡抑制信号通路FADD/cFlip/ Traf2启动, IL-2处理sh-PLCε组后, Fas下游凋亡信号通路FADD/Caspase8/Caspase3启动。共培养实验后流式细胞术结果显示, IL-2处理与sh-PLCε联用组细胞凋亡比例最高。该实验证明, sh-PLCε可以通过启动Fas下游凋亡信号通路, 抑制凋亡抑制信号通路来提高IL-2治疗肾癌的疗效。