尿源性干细胞移植修复慢性肝损伤裸鼠肝脏功能

胡超群^1,2方姝煜¹ 龚梦嘉¹ 何昀¹ 毕杨^1*

¹重庆医科大学附属儿童医院儿研所干细胞实验室, 儿童发育疾病研究教育部重点实验室, 重庆 400014;²重庆市干细胞治疗工程技术研究中心, 重庆 400014

摘要 :

该研究探讨尿源性干细胞(urine-derived stem cells, USCs)的生物学性状及移植治疗慢
性肝损失模型的可能。分离培养USCs, 观察细胞形态、流式细胞术检测干细胞表面标记, 碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色、茜素红染色、油红O染色、ICG(indocyanine green)摄取实验、PAS(periodic acid-Schiff)染色等评估其成骨、成脂和成肝分化。建立四氯化碳(carbon tetrachloride,CCL4)诱导的慢性肝损伤模型, 尾静脉4次移植USCs, 计算肝脏指数, 检测血清ALT、AST, HE及Masson染色, 评估治疗效果。结果表明, USCs为米粒状贴壁生长细胞, 表达多种间充质干细胞标志物: CD24、CD29、CD73、CD90和CD105, 表达细胞周期表面标志物CD146, 不表达造血细胞表面标志物CD31、CD34、CD45。成骨成肝诱导的USCs后ALP染色、茜素红染色、油红O染色阳性, 单纯成肝诱导后几乎无ICG摄取及PAS染色阳性的细胞, 而与肝干细胞共培养的USCs诱导组中, 约10%细胞有ICG摄取及PAS染色阳性。与模型组相比, USCs移植组肝脏指数显著降低, ALT、AST降低但无统计学意义, 肝细胞退行性变及纤维增生明显改善。该研究成功分离培养出增殖能力强并具有多向分化潜能的USCs, 移植入慢性肝损伤裸鼠, 可在一定程度上修复肝脏损伤。