质粒电穿孔Jurkat细胞递送CRISPR/Cas9系统的优化
赵日1,2 蒙露3 冯建琼2 刘攀3 家婷1 郑武燕4 张悦5 刘佳慧4 张涛2 邹强3 李华2*
1西南交通大学医学院, 成都 610031; 2西部战区总医院, 成都 610083; 3成都医学院, 成都 610500;4成都中医药大学, 成都 610075; 5川北医学院, 南充 637007
摘要 :
CRISPR/Cas9是一种应用广泛的高效基因编辑技术。运用CRISPR/Cas9对T细胞进行基因修饰能增强T细胞的特异性免疫应答能力, 在过继性肿瘤免疫T细胞治疗中具有巨大应用前景。CRISPR/Cas9的递送途径及效率影响着其基因编辑的效率。电穿孔是一种安全、简单、经济、高效、适用范围广和重复性好的转染方法, 可用来高效递送CRISPR/Cas9系统。本研究以常用的T淋巴细胞系癌细胞Jurkat细胞为T细胞模型材料, 利用绿色荧光蛋白基因质粒观测转染效率, 探索质粒电穿孔Jurkat细胞的最优体系, 进一步采用该优化体系成功递送CRISPR/Cas9系统进入Jurkat细胞, 高效地敲除目的β2M基因, 使之成为HLA-I− Jurkat细胞。该研究提供了适用于质粒CRISPR/Cas9系统电穿孔T细胞的优化系统, 为后续将CRISPR/Cas9基因编辑系统运用于过继性T细胞肿瘤治疗奠定了基础。
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