microRNA-708-5p对骨肉瘤细胞凋亡与迁移的作用及机制

丰天宇¹ 朱中凯² 王豪¹ 毛筱涵¹ 刘丹¹ 袁仁杰¹ 刘跃华¹ 左国伟¹ 张明昊^3*

¹重庆医科大学检验医学院, 临床检验诊断学教育部重点实验室, 重庆市重点实验室, 重庆 400016; ²重庆医科大学附属第一医院心血管内科, 重庆 400016; ³重庆医科大学实验教学管理中心, 重庆 400016

摘要 : 该文主要研究microRNA-708-5p(miR-708-5p)在骨肉瘤细胞中的表达及对细胞凋亡、迁移的影响及机制。该研究利用miRNA基因芯片筛选差异表达miRNA; qRT-PCR(quantitative Realtime PCR)检测miR-708-5p在骨肉瘤细胞株MG63和正常细胞hMSC、HS-5中的表达; 通过阳离子脂质体介导法过表达miR-708-5p; 分别用Hoechst 33258染色、流式细胞术、划痕实验、Transwell 法检测凋亡和迁移; 通过qRT-PCR检测miR-708-5p、ZEB1(Zinc finger E-box binding homeobox 1)的 RNA水平; Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、ZEB1蛋白表达; 利用TargetScan和双荧光素酶报告实验预测并验证miR-708-5p与ZEB1的靶向关系。结果显示, miR-708-5p在MG63中表达下调, 恢复miR-708-5p表达水平可诱导MG63细胞凋亡并抑制迁移。Western blot结果显示, 过表达miR- 708-5p可上调E-cadherin, 下调N-cadherin和ZEB1。双荧光素酶报告实验显示, miR-708-5p可直接靶向ZEB1。敲低ZEB1可抑制MG63迁移。该项研究结果表明, miR-708-5p可诱导骨肉瘤细胞凋亡, 且通过靶向ZEB1来抑制迁移。