稳定抑制TRPM2基因表达肺微血管内皮细胞系的构建与鉴定

梁亭² 李瑶¹ 罗强² 王少华¹ 李军² 徐明举¹ 张瑞华¹ 徐彤^1,2*

¹河北北方学院预防兽医学重点实验室, 张家口 075000; ²河北北方学院生命科学研究中心, 张家口 075000

摘要 : 应用短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC), 对其M2型瞬时受体电位(TRPM2)基因进行干扰, 以建立稳定shRNA TRPM2 PMVEC细胞株。结果表明, 正常PMVEC对胰酶的最大耐受浓度和嘌呤霉素最小致死剂量分别为0.4 μg/mL和0.6 μg/mL; 然后加入0.6、2.0、4.0、8.0 μg/mL嘌呤霉素筛选稳定抑制TRPM2表达的shRNA TRPM2 PMVEC株, 结果在嘌呤霉素达到8 μg/mL时该细胞株仍细胞生长良好; Semi-quantitative PCR和Western blot对获得阳性细胞株进行TRPM2基因和蛋白表达的检测显示, shRNA TRPM2阳性PMVEC的TRPM2基因和蛋白表达相对量显著低于阴性对照和正常对照组(P<0.01)。该研究通过shRNA慢病毒载体成功建立了稳定shRNA TRPM2 PMVEC细胞株, 为进一步开展TRPM2在流感病毒诱导肺微血管内皮细胞损伤的作用机制奠定了基础。