GPR183慢病毒载体的构建及对Cutll1细胞凋亡的影响

摘要 : 该文旨在构建过表达人GPR183的慢病毒载体, 研究GPR183对急性T淋巴细胞白血病 (T-cell acute lymphocytic leukemia, T-ALL)细胞Cutll1凋亡的影响。通过PCR法扩增人GPR183序列 片段, 并连接到慢病毒表达载体质粒pEZ-Lv201上, 构建过表达GPR183慢病毒质粒, 包装病毒, 感 染T-ALL Cutll1细胞, q-PCR及Western blot检测细胞GPR183表达水平; 检测GPR183对Cutll1细胞 生长、周期及凋亡影响。质粒PCR及测序结果显示, 成功构建GPR183过表达慢病毒载体。感染 Cutll1细胞后荧光显微镜下观察到绿色荧光, 过表达组GPR183 mRNA及蛋白表达水平较对照组明 显上升(P<0.01), 成功构建过表达GPR183的Cutll1细胞株, 过表达GPR183的Cutll1细胞生长明显受 到抑制(P<0.001), 凋亡水平较对照组显著升高(P<0.01), 但不影响细胞周期。初步显示, GPR183能 明显抑制T-ALL Cutll1细胞增长, 促进细胞凋亡, 为后续研究奠定基础。