人源跨膜蛋白43(TMEM43)的检测、细胞内定位及体外真核表达

张海霞1,2 李倩3 王丹4 赵克学3 韩玉梅3 王兴陇3 梁浩勤3 邓盈盈3 佟春微3 李向茸1 马忠仁1,2 冯若飞1,2*

1西北民族大学生物工程与技术国家民委重点实验室, 兰州 730030; 2甘肃省动物细胞工程技术研究中心, 兰州 730030; 3西北民族大学生命科学与工程学院, 兰州 730030; 4兰州民海生物工程有限公司, 兰州 730030

摘要 : 为探究人源跨膜蛋白43(TMEM43)基因含量、定位分布及体外真核表达情况, 利用 RT-PCR及Western blot方法分别检测内源MRC-5和HEK293细胞内TMEM43基因及其蛋白表达情况, 采用间接免疫荧光实验进一步分析其在MRC-5细胞内的分布; 构建重组表达载体pcDNA3.1- EGFP-TMEM43, 转染至HEK293细胞内检测外源TMEM43在HEK293细胞内的基因和蛋白表达情况。结果显示, 基因水平TMEM43在MRC-5细胞内的表达明显高于HEK293细胞, 蛋白水平仅能检测到MRC-5细胞内TMEM43的表达。重组表达质粒pcDNA3.1-EGFP-TMEM43转染HEK293细胞后, 基因水平TMEM43表达显著升高, Western blot可检测到转染后细胞内TMEM43蛋白成功表达。结果表明, 不同细胞表达TMEM43含量存在差异, 肺来源细胞内TMEM43的表达明显高于肾来源的细胞; 构建的重组载体pcDNA3.1-EGFP-TMEM43可成功转染HEK293细胞并表达。该研究为 TMEM43结构及功能、与疾病相关机理的进一步探究提供了实验依据。