优化硝酸银染色在心肌线粒体蛋白双向电泳后凝胶染色中的应用

魏义勇1 李科2 刘云3 喻守佳4 王海英1 喻田5*

1遵义医学院附属医院麻醉科, 遵义 563000; 2遵义医学院附属口腔医院麻醉科, 遵义 563000; 3遵义医学院医学与生物学研究中心, 遵义 563000; 4遵义市第一人民医院ICU, 遵义 563000; 5遵义医学院贵州省麻醉与器官保护基础研究重点实验室, 遵义 563000

摘要 : 蛋白组学研究中双向电泳(2-DE)后的SDS-PAGE凝胶染色存在灵敏度和质谱兼容性问题。线粒体中存在大量微量蛋白, 对于这类亚细胞器蛋白质2-DE后的凝胶染色, 这两种特性显得尤为重要。经典的硝酸银染色虽灵敏度高, 但之后的质谱鉴定兼容性欠佳。因此, 该研究通过优化硝酸银染色方法观察大鼠心肌线粒体蛋白质2-DE后的凝胶染色效果, 挖取部分蛋白质斑点酶解后行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定, 验证优化硝酸银染色与质谱鉴定的兼容性。结果表明, 优化后的硝酸银染色方法灵敏度高, 与MALDI-TOF-MS兼容性好, 是一种线粒体蛋白质2-DE后染色的理想方法。