CRISPR/Cas9技术敲除人前列腺癌 PC-3细胞BLM解旋酶基因的研究

陈琨1,2,3 许厚强1* 赵佳福1,2 段志强1 吴萍1

1贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室, 贵阳 550025; 2贵州大学生命科学学院, 贵阳 550025; 3贵州省人民医院, 贵阳 550003

摘要 : BLM解旋酶是人类RecQ解旋酶家族的重要一员, 在DNA的复制、修复、重组、转录、端粒的维持等细胞代谢过程中具有重要的作用。BLM基因与前列腺癌易感性相关, 可作为治疗前列腺癌的候选基因。该研究设计了5个Cas9/SgRNA载体, 并通过T7E1酶筛选出活性最强的SgRNA3载体, 利用脂质体LTX将其与供体载体共同导入前列腺癌PC-3细胞。BLa和Puro抗性筛选及荧光蛋白标记甄别获得带阳性标记的细胞。Western blot及RTq-PCR检测证明, 前列腺癌PC-3细胞中的BLM解旋酶基因被成功敲除, 为深入研究BLM解旋酶基因在前列腺癌中的作用提供了重要的科学数据。