牙鲆卵原细胞鉴定、分离及纯化的初步研究

摘要 : 为获得高比例和高数量的卵原细胞, 采用酶组合消化和Percoll梯度离心法开展了不 同月龄牙鲆卵原细胞分离纯化的研究。通过光学观察及Vasa蛋白在生殖细胞的定位对卵原细胞 进行了鉴定区分。结果表明, 所获卵巢单细胞悬液中, 6月龄每毫克卵巢组织获得的卵原细胞量为 (9.86±1.02)×104个, 显著高于18月龄和30月龄(P<0.05)。Percoll梯度离心后, 卵原细胞主要分布于 L-15与20% Percoll梯度液间、20%~35% Percoll梯度液间, 其占比高达75%以上, 显著高于纯化前卵 原细胞占比(P<0.05); 且细胞存活率高达84%以上, 与纯化前细胞存活率无显著性差异(P>0.05)。除 18月龄外, 6月龄和30月龄每毫克卵巢组织获得的卵原细胞量纯化前后均无显著性差异(P>0.05)。 通过酶组合消化和Percoll梯度离心的方法对最适月龄—6月龄牙鲆卵原细胞进行分离纯化, 最终 可获得高比例、高数量和高活性的卵原细胞, 为进一步开展牙鲆生殖细胞移植、基因修饰等研究 提供了必备的细胞来源。