遗传性红细胞增多症相关HIF2α基因点突变对人CD34+造血干祖细胞体外红系分化的影响

摘要 : 该文旨在研究与遗传性红细胞增多症相关的低氧诱导因子HIF2α基因点突变对人 造血干祖细胞红系分化的影响。通过构建人HIF2α基因编码区、携带疾病相关的两个点突变体 (M535V和G537R)以及文献中报道的HIF2α基因阳性对照突变(P531A)慢病毒表达载体, 分别包装 病毒并感染人脐血来源的CD34+造血干祖细胞, 并进行常氧及5%低氧条件下的红系定向诱导分化 培养。利用FACS流式分析比较红系分化进程特征分子CD71和CD235a的表达变化, 结合荧光定量 PCR检测HIF2α调控的红系分化相关的靶基因表达水平。结果显示, 构建的HIF2α及突变体的慢病 毒载体, 经病毒包装后感染K562细胞可在RNA和蛋白水平实现过表达; 与对照组相比, 感染表达 HIF2α基因或其突变体病毒后的脐血CD34+HSPC在常氧及5% O2条件下诱导红系分化培养的细胞 CD71和CD235a的表达动态均无明显改变, 但HIF调控的红系分化相关基因EPOR和VEGFA的表达 有一定升高。综上, 在体外红系分化培养体系中, 慢病毒介导的HIF2α及突变体的过表达不直接影 响造血干祖细胞的红系分化进程, 提示疾病相关的HIF2α基因突变造成的红系分化异常增多的细 胞内外调控机制需要更进一步的深入研究。