miR-let-7b慢病毒载体促进大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化

摘要 : 微小RNA在生命体生长、衰老的过程中起着重要的作用, 参与骨髓间充质干细胞 (MSCs)重要的生物学进程, 包括增殖、分化、信号转导和死亡等。该文探讨了miR-let-7b对MSCs 来源神经细胞的调控作用。体外分离、扩增大鼠MSCs, 通过细胞形态学观察、表面标志物的流 式细胞仪检测进行鉴定。将MSCs分为miR-let-7b+组、miR-let-7b-组和对照组, 分别转染miR-let- 7b慢病毒载体、Anti-rno-miR-let-7b Inhibitor载体及不进行任何转染操作, 实时荧光定量PCR(RTqPCR) 检测各组细胞miR-let-7b的表达水平, 确认转染情况。多因子联合法诱导各组MSCs向神经 细胞分化, RT-qPCR检测神经细胞标志物MAP-2的表达, 免疫细胞化学染色检测神经原特异性烯醇 化酶(NSE)的表达和各组MSCs的神经细胞分化率。分离培养的MSCs在镜下呈长梭形或成纤维细 胞样, CD90、CD44阳性表达率均大于90%, CD45的表达不足2%, 证实得到的细胞即为MSCs。RTqPCR 结果显示, 与对照组相比, miR-let-7b+组的miR-let-7b表达水平升高, miR-let-7b-组几乎未检测 到miR-let-7, 提示miR-let-7b载体及miR-let-7b Inhibitor载体均成功转染了MSCs。经诱导分化后, 与 对照组相比, miR-let-7b+组神经细胞标志蛋白SIM312、Gap43、MBP和NSE与对照组相比表达水 平显著升高(P<0.05); miR-let-7b-组SIM312、Gap43、MBP和NSE表达水平与miR-let-7b+组相比具 有明显差异(P<0.05)。结果提示, miR-let-7b可以促进MSCs向神经细胞分化, 通过控制miR-let-7b的 水平可以调控MSCs的神经细胞分化率。