沙冬青端粒酶逆转录酶基因(AmTERT)克隆及表达分析
孙丽春1 杨 颖1 于婷乔1 孙玉萍1 高海波2 王瑾瑜3 门煜1 卢存福1* 陈玉珍1*
1北京林木分子设计育种高精尖创新中心, 北京林业大学生物科学与技术学院, 林木育种国家工程中心, 北京 100083; 2临沂大学生命科学学院, 临沂 276000; 3清华大学分析测试中心, 北京 100084
摘要 :
利用分段克隆法从沙冬青中得到一条全长为3 459 bp的端粒酶逆转录酶基因(telomerase reverse transcriptase of Ammopiptanthus mongolicus, AmTERT), 并对AmTERT进行了系统的生物信 息学分析。结果表明, AmTERT编码1 153个氨基酸, 蛋白相对分子质量为132.52 kDa, 等电点为9.49, 属于稳定性较差的亲水性蛋白。未发现跨膜结构存在, 定位预测结果显示其在细胞质膜及线粒体 上有定位, 同时发现其有单分型(NLS-monopartite)和双分型(NLS-bipartite)细胞核定位信号, 而在原 生质体中的瞬时表达实验结果表明AmTERT定位在细胞核中。该氨基酸序列共有147个潜在磷酸 化位点, 氨基酸比对结果显示, AmTERT与大豆TERT相似性高达75%。另外, AmTERT蛋白具有端 粒酶逆转录酶的保守功能结构域(TRBD及RT), 并存在潜在的Akt激酶磷酸化位点, 暗示其可能通过 磷酸化作用发挥调节自身或其他基因功能的作用。荧光定量PCR结果显示, AmTERT在根中表达量 较茎和叶组织都高, 盐、干旱、热及低温胁迫均能导致沙冬青幼苗根和叶中AmTERT的表达量升高, 说明植物细胞端粒酶可能和动物细胞一样具有应激保护功能。综上, 研究结果表明, 沙冬青端粒酶 可能存在非端粒功能。
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