p85a基因对人神经母细胞瘤SY5Y细胞迁移的影响
陈林华 敬 霞 王丽花 王 教*
温州医科大学附属眼视光医院, 眼视光学和视觉科学国家重点实验室, 温州 325027
摘要 :
通过干扰p85a基因的表达, 探讨其在人神经母细胞瘤SY5Y细胞迁移中的作用及对 mRNA和蛋白质水平的影响。首先, 构建p85a基因的干扰质粒siRNA质粒(si-p85a)和过表达质粒 (OE-p85a), 转染人神经母细胞瘤SY5Y细胞, 48 h后, 用定量PCR方法检测p85a基因的mRNA水 平变化; Western blot检测其蛋白质水平变化; 用流式细胞术检测细胞周期变化; 随后, 将si-p85a、 OE-p85a等质粒转染12孔板中的细胞, 分别在24、48、72 h时做划痕实验, 观察细胞迁移的变化。 定量PCR显示, 与MOCK组相比, 不同组p85a基因表达有差异。干扰质粒(si-p85a)组表达降低, 约 为对照组的0.42倍; 而过表达(OE-p85a)组表达明显升高, 为对照组的22.84倍, 均有显著性统计学 差异(P<0.05)。Western blot结果显示, 转染si-p85a质粒后, p85a蛋白质水平下降; 而转染OE-p85a 质粒, p85a蛋白质水平升高。划痕实验中, 转染OE-p85a可促进SY5Y细胞迁移, 转染si-p85a后抑制 细胞迁移, 均有统计学差异(P<0.05)。实验结果表明, 在SY5Y细胞生长过程中, p85a基因起到重要 作用, 可以促进SY5Y细胞迁移运动。
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