敲除C3G对H9C2心肌细胞增殖及凋亡的影响

该研究构建了NT CRISPR/Cas9(阴性对照)及C3G CRISPR/Cas9质粒, 分别将其包装成重组慢病毒, 并感染H9C2心肌细胞, 以研究敲除C3G(Crk SH3域结合鸟嘌呤核苷酸交换因子) 对H9C2心肌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。将实验分为NT CRISPR/Cas9组、C3G CRISPR/ Cas9组、NT CRISPR/Cas9低氧组和C3G CRISPR/Cas9低氧组。通过RT-PCR检测C3G mRNA 的表达; Western blot检测相关蛋白表达; CCK-8法检测细胞增殖; 流式细胞术检测细胞凋亡。结果显示, C3G CRISPR/Cas9组和C3G CRISPR/Cas9低氧组的C3G mRNA和蛋白无表达; 分别与 NT CRISPR/Cas9组和NT CRISPR/Cas9低氧组比较, C3G CRISPR/Cas9组和C3G CRISPR/Cas9低 氧组的p-ERK1/2和Bcl-2蛋白以及细胞增殖水平均降低(P<0.05), Bax蛋白及细胞凋亡水平均增 加(P<0.05); 与NT CRISPR/Cas9组相比, NT CRISPR/Cas9低氧组C3G mRNA和蛋白表达均降低 (P<0.05), p-ERK1/2和Bcl-2蛋白及细胞增殖水平均降低(P<0.05), Bax蛋白及细胞凋亡水平均增加 (P<0.05); 与C3G CRISPR/Cas9组相比, C3G CRISPR/Cas9低氧组的p-ERK1/2和Bcl-2蛋白及细胞增殖水平均降低(P<0.05), Bax蛋白及细胞凋亡水平均增加(P<0.05)。以上结果表明, 敲除C3G能通过调控p-ERK1/2、Bcl-2及Bax抑制H9C2心肌细胞增殖并促进其凋亡。