对乙酰氨基酚耐受肝细胞株的建立及其作用机制研究
曹欢欢1,2 茅育蕾1,3 陈娟慧1 陈佳媛1 郑锐攀1 岑梦娇1 倪 坚1 金立方1,2*
1绍兴文理学院生命科学学院, 绍兴 312000; 2杭州精准医药研究中心, 杭州 310018; 3绍兴文理学院附属医院, 绍兴 312000
摘要 :
对乙酰氨基酚(acetaminophen, APAP)是引起急性肝衰竭最主要的原因, 但其确切的作用机制仍不明了。该研究建立了不同浓度的APAP耐药肝细胞, 并对其耐药机制进行初步研究。克隆状密度培养的AML-12小鼠肝细胞浓度递增诱导建立APAP耐药细胞系; 细胞计数检测细胞增殖能力; Mito Tracker和H2DCF-DA分别检测线粒体膜电位和氧自由基水平, GSH/GSSH检测细胞抗氧化能力, qPCR检测细胞基因表达水平, Western blot检测蛋白质水平。成功建立了增殖和耐药稳定的1.25和2.50 mmol/L APAP耐药AML-12肝细胞。在相应浓度APAP处理后, 与对照组相比, 耐药组细胞增殖能力强, 氧自由基水平低, 线粒体膜电位水平高, GSH/GSSH值高。进一步研究结果显示,耐受组细胞抗氧化通路Nrf2及其靶基因表达活性提高, 而凋亡相关信号通路JNK及其相关基因活性下降。肝细胞表型特征分析显示, 耐药组细胞肝功能相关基因表达水平并未发生显著变化, 但与染色体重塑相关的转录因子Foxa1和Foxa2 mRNA和蛋白质水平显著升高。该研究建立了增殖和耐药性状稳定的APAP耐药肝细胞, 耐药性状的获得与抗氧化能力和抗凋亡能力的提高相关, 并提示染色体重塑相关转录因子也可能参与这一过程, 为深入研究耐药机制奠定了基础。
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