通过CRISPR/Cas9基因编辑手段构建白念珠菌 CaHSL1基因的失活突变体及其表型分析

徐慧慧1 蒋伶活1,2* Malcolm Whiteway3

1江南大学生物工程学院粮食发酵工艺与技术国家工程实验室, 无锡 214122; 2山东理工大学农业工程与食品科学学院, 淄博 255000; 3康考迪亚大学生物学系, 蒙特利尔市, 魁北克省, 加拿大 H4B1R6

摘要 :

钙离子稳态和钙离子信号途径对白念珠菌的形态发生、耐药性以及毒力都十分重要。白念珠菌和酿酒酵母菌的细胞质膜蛋白质Rch1p均富集在母细胞和子细胞之间的芽颈部位, 负向调控胞外钙离子的内流。与细胞周期调控相关的蛋白激酶Hsl1p也存在于白念珠菌和酿酒酵母菌的芽颈部位。该研究发现, 抑制CaHSL1基因的表达或者通过CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeat)/Cas9新方法失活CaHSL1基因, 均可导致白念珠菌对钙离子敏感, 这种钙离子敏感性可以被钙调磷酸酯酶的专一性抑制剂环孢霉素抑制。这个结果表明, 钙离子稳态和钙信号转导途径可能与细胞周期调控有关。此外, CaHSL1基因失活突变体对十二烷基磺酸钠、氟康唑、酮康唑、刚果红、潮霉素B、卡泊芬净和Anidualafungin敏感, 表明CaHsl1p与细胞质膜和细胞壁胁迫的应答相关。