胆汁淤积性肝硬化来源的微环境因子对肝脏干细胞分化的影响

王健1,2 康权1,2* 罗庆2 杨博1,2 肖程1,2 李志鹏1,2 龚梦嘉2 毕杨2

1重庆医科大学附属儿童医院肝胆外科, 重庆 400014; 2重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所干细胞实验室, 儿童发育疾病研究教育部重点实验室, 儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地, 儿科学重庆市重点实验室, 重庆 400014

摘要 :

该研究探讨了胆汁淤积性肝硬化病理微环境来源的细胞因子在胆总管结扎小鼠不同时间点的表达变化, 且在体外致力寻找最优的细胞因子组合高效诱导肝脏干细胞HP14-19分化为成熟肝细胞。以Balb/c小鼠胆总管结扎(bile duct ligation, BDL)模拟胆汁淤积性肝硬化病理微环境; 免疫组织化学检测胆总管结扎小鼠肝组织中细胞因子EGF、HGF及TGF-α的表达; 以小鼠胚胎肝干细胞HP14-19细胞为研究对象, 以不同浓度在不同时间点进行荧光素酶报告基因检测ALB-Gluc 活性; qRT-PCR、Western blot检测肝细胞相关标志物表达; 吲哚菁绿(indocyanine green, ICG)及过碘酸–希夫(periodicacid-schiff, PAS)染色检测肝细胞的成熟功能。结果显示, 小鼠胆总管结扎能成功模拟胆汁淤积性肝硬化, 并随结扎时间延长肝硬化程度加重; 与对照相比, 在EGF(10 ng/mL)、 HGF(20 ng/mL)、TGF-α(20 ng/mL)单独诱导HP14-19细胞能有效增强ALB-Gluc活性(P<0.05); 且在EGF(10 ng/mL)、HGF(20 ng/mL)、TGF-α(20 ng/mL)联合诱导HP14-19细胞时显著增强ALBGluc 活性(P<0.05); qRT-PCR、Western-blot显示, ALB、CK18表达随时间增加而增加, 而AFP表达则相反。ICG摄取及PAS染色阳性细胞数显著增加(P<0.05)。因此, 胆汁淤积性肝硬化病理微环境来源的细胞因子能有效促进肝脏干细胞肝向分化, 将对细胞因子联合肝脏干细胞移植治疗胆汁淤积性肝硬化有一定的指导意义。