利用冰核蛋白N-端结构域在大肠杆菌表面展示人存活蛋白
罗砚曦1 蒋依俐2 阎 辉1*
1浙江省医学科学院药物所, 杭州 310013; 2杭州师范大学医学院, 杭州 310013
摘要 : 存活蛋白(survivin)是高度特异的广谱肿瘤相关抗原, 利用冰核蛋白(ice nucleation
protein, INP)表面展示系统研究在大肠杆菌细胞表面展示人存活蛋白的可行性。将人存活蛋白基因片段和报告基因Cherry融合到冰核蛋白N-端, 构建表面展示载体pET-INP-CHY-SUV并转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经IPTG诱导后可检测到红荧光, 荧光强度在胰蛋白酶的作用下降低, 完整细胞ELISA实验及免疫荧光实验可检测和观察到绿荧光, 表明人存活蛋白在重组菌中得到表达, 并且成功展示于细胞表面, 为进一步研制新型的肿瘤DNA疫苗奠定基础。
protein, INP)表面展示系统研究在大肠杆菌细胞表面展示人存活蛋白的可行性。将人存活蛋白基因片段和报告基因Cherry融合到冰核蛋白N-端, 构建表面展示载体pET-INP-CHY-SUV并转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经IPTG诱导后可检测到红荧光, 荧光强度在胰蛋白酶的作用下降低, 完整细胞ELISA实验及免疫荧光实验可检测和观察到绿荧光, 表明人存活蛋白在重组菌中得到表达, 并且成功展示于细胞表面, 为进一步研制新型的肿瘤DNA疫苗奠定基础。
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