慢病毒介导的TPX2沉默对人宫颈癌HeLa细胞凋亡和侵袭的影响及机制

摘要 : 该文的目的是研究慢病毒介导的Xklp2靶蛋白(targeting protein for Xklp2, TPX2)沉默对人宫颈癌HeLa细胞凋亡、侵袭的影响及机制。构建4种载有TPX2-shRNA的重组慢病毒及其阴性对照, 将5种重组慢病毒分别稳定感染人宫颈癌HeLa细胞, 利用实时荧光定量PCR和Western blot筛选出TPX2沉默效果最佳的一组HeLa细胞作为干扰组进行后续实验。采用Transwell基底膜侵袭实验测定各组细胞的侵袭能力。采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。Western blot检测TPX2-shRNA转染前后细胞凋亡及侵袭相关蛋白质Bcl-2、Bax、Caspase-3、MMP9、TIMP-1及nm23-H1水平。结果显示, 筛选出的RNA干扰慢病毒载体LV-TPX2-shRNA-1可有效抑制HeLa细胞TPX2的表达; 与对照组相比, 干扰组的HeLa细胞凋亡率明显增加(P<0.01); 穿过Transwell小室基底膜细胞明显减少(P<0.01)。HeLa细胞感染LV-TPX2-shRNA-1能下调凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平, 上调Caspase-3及Bax的表达水平(P<0.05); 上调侵袭相关蛋白质nm23-H1及TIMP-1水平, 下调MMP9水平(P<0.05)。以上结果表明, 沉默TPX2表达能增加宫颈癌细胞的凋亡, 可能与其上调Caspase-3及Bax水平, 下调Bcl-2水平有关; 沉默TPX2表达能抑制宫颈癌细胞侵袭能力, 可能与其上调TIMP-1及nm23-H1水平, 下调MMP9的水平有关。

CSTR: 32200.14.cjcb.2017.11.0006