内质网应激调控重楼皂苷I诱导肝癌HepG2细胞凋亡的研究
阳丹丹1 齐 琪1 陈正礼1,2 陈 兵1 黄 超1,2 罗启慧1,2* 刘文涛1,2
1四川农业大学动物医学院, 实验动物疾病模型研究室, 成都 611130;2四川农业大学动物医学院, 动物疾病与人类健康中心四川省重点实验室, 成都 611130
摘要 : 该文探讨了内质网应激在重楼皂苷I(polyphyllin I, PPI)诱导人肝癌HepG2细胞凋亡中的作用。采用CCK-8法检测不同浓度的重楼皂苷I处理HepG2细胞6、12、24 h后细胞的增殖情况;采用Hoechst 33258染色检测细胞凋亡情况; 应用qRT-PCR(Real-time quantitative PCR)检测内质网应激相关基因GRP78、ATF-6、PERK、IRE-1的mRNA水平; 采用Western blot方法分析重楼皂苷I对Cleaved-caspase12、Caspase-12、Cleaved-caspase3、Bax、Bcl-2、IRE-1、XBP1、CHOP和P-JNK1蛋白质水平的影响; 并用流式细胞术检测20 mmol/L内质网抑制剂4-苯基丁酸(4-phenyl butyric acid,4-PBA)对细胞凋亡率的影响。结果发现, 重楼皂苷I以时间–浓度依赖的方式抑制HepG2细胞的增殖; 细胞出现典型的凋亡形态; ATF-6和PERK mRNA水平无明显变化, GRP78和IRE-1 mRNA水平较阴性对照组(0 h)均显著增加(P<0.05); 重楼皂苷I通过增加Bax、减少Bcl-2蛋白质水平进而活化Caspase-3来诱导细胞凋亡。进一步研究发现, 重楼皂苷I可上调内质网应激通路的IRE-1, 下调P-JNK1和XBP1蛋白质水平及活化内质网应激的标志蛋白质Caspase-12, 但CHOP蛋白质水平无明显变化。流式细胞术结果显示, 4-PBA与2.5 μmol/L重楼皂苷I联合作用组的细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。因此, 内质网应激参与了重楼皂苷I诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡, 且在该过程中对细胞起到保护作用。
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