活体染色显微技术和绿色荧光蛋白在本科实验教学中的应用

摘要 : 激光扫描共聚焦显微镜的原理和使用是本科生细胞生物学实验教学中的重要内容。目前, 在细胞生物学实验教学中常使用绿色新鲜的植物叶片作为实验材料, 在激光扫描共聚焦显微镜下对叶绿体的自发荧光进行观察。叶绿体的自发荧光信号强而且范围广, 使学生难以清晰地理解特异性的荧光信号。该文通过对转p35S::Naa10-GFP基因拟南芥幼苗的根尖进行活体染色[碘化丙啶(propidium iodide, PI)和4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole, DAPI)染色], 在不同的激发光下, 收集相应的荧光信号, 通过计算机辅助成像, 获得不同颜色叠加的特异荧光信号图像。该实验设计简单可行, 获得的图像清晰且便于观察, 能够使初学者直观并且深刻理解激光扫描共聚焦显微镜的原理和使用方法, 适合在高校细胞生物学实验教学中推广, 同时也为研究其他蛋白质亚细胞定位提供技术参考。