重组肽rLj-RGD4对小鼠黑色素瘤B16细胞活性的影响

摘要 : 该研究在前期重组日本七鳃鳗RGD3毒素蛋白(recombinant Lampetra japonica RGD3,rLj-RGD3)工作基础上, 设计并人工合成分子克隆, 获得去纯化标签的rLj-RGD4。该论文采用小鼠黑色素瘤(B16)为肿瘤细胞模型, 对rLj-RGD4是否抑制B16细胞增殖、迁移、浸润与凋亡进行了研究。研究结果表明, 采用不同浓度的rLj-RGD4经MTT方法检测发现, rLj-RGD4对B16细胞的增殖有抑制作用, IC50为9.6 μmol/L; 使用Transwell法和细胞划痕实验结果证实, rLj-RGD4对B16细胞的迁移和浸润都具有抑制作用, 且呈剂量依赖方式; B16细胞经鬼笔环肽-FITC染色结果显示, rLj-RGD4肽对B16细胞骨架发生破坏; Hoechst 33258法和TUNEL-FITC法结果显示, rLj-RGD4可诱导B16细胞发生凋亡; 运用Western blot对其诱导B16细胞发生凋亡的作用机制研究结果显示, 随着rLj-RGD4浓度的增加cleaved-caspase-8和cleaved-caspase-3的水平显著增加, B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma/leukaemia-2, Bcl-2)基因水平量显著减少。由此可见, rLj-RGD4具有显著促B16细胞凋亡的作用, 具有抑制增殖与侵袭的功能, 有可能成为一个具有抗肿瘤作用的候选药物。