高 GC含量基因 NADK2的扩增及其真核表达载体的构建

陈静怡张泸娇刘丹慧^*

温州医科大学检验医学院、生命科学学院, 检验医学教育部重点实验室,浙江省医学遗传学重点实验室, 温州 325035

摘要 : 在构建线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶(mitochondrial nicotinamide adenine dinucleotide kinase, NADK2)真核表达载体时, 该文发现, 使用Ex Taq DNA聚合酶扩增无法得到其编码区域全长, 5′端缺失一段DNA片段。对其cDNA序列进行分析发现, NADK2编码区GC含量不均衡。起始密码子附近GC含量最高可达92.5%, 而3′端终止密码子附近GC含量最低只有27.5%。之后, 使用LA Taq及GC缓冲液进行扩增, 得到了NADK2基因ORF(open reading frame)全长, 并克隆入真核表达载体。该文结果对类似高GC含量DNA片段的PCR扩增有一定的提示作用。