miR-155通过下调BMP9/Smad信号通路抑制间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化
刘红霞 施 琼 安利钦 周一青 张汝益 严树涓 翁亚光*
该文研究了在诱导小鼠间充质干细胞C3H10T1/2细胞成骨分化过程中miR-155的作用及其是否是通过调控BMP9/Smad(bonemorphogenetic protein 9/drosophila mothers against de-capentaplegic)信号通路发挥作用。在诱导C3H10T1/2细胞成骨分化过程中, 采用实时定量PCR(Real-time quantitative PCR, qRT-PCR) 检测miR-155水平的变化。转染miR-155模拟剂(miR-155)至C3H10T1/2细胞后, miR-155水平显著增高(P<0.001), 而转染其抑制剂(anti-miR-155)至C3H10T1/2细胞后, miR-155水平显著降低(P<0.001)。转染后成骨诱导培养基诱导成骨7 d, 碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性及染色结果显示, miR-155能显著降低C3H10T1/2细胞成骨分化过程中的ALP活性(P<0.01)、减弱ALP染色, 而anti-miR-155则能逆转其作用。成骨诱导14 d茜素红S染色结果显示, miR-155组钙盐结节较对照组少, 下调miR-155的水平后, 钙盐沉积结节增多。qRT-RCR检测结果显示, miR-155显著降低BMP9 mRNA水平(P<0.001), 且miR-155组成骨基因Runx2和ALP表达均显著低于对照NC组(P<0.05、P<0.01)。Western blot检测BMP9、Runx2和p-Smad1/5/8蛋白质水平,结果显示, miR-155组蛋白质水平均显著降低(P<0.01、P<0.05、P<0.001)。该研究结果提示, miR-155对C3H10T1/2细胞成骨分化的抑制作用可能是通过抑制BMP9/Smad信号通路发挥作用的。
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