microRNA-125b调控心肌梗死后炎症的作用及其在不同心脏组成细胞中的调控作用

摘要 : 该研究旨在探究小鼠微小RNA-125b(microRNA-125b, miR-125b)调控心肌梗死后, 内源性危险因子即高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein, HMGB1)释放诱导的炎症反应及其在3种心脏主要组成细胞中调控作用的比较。首先建立小鼠心梗模型, 检测心梗早期miR-125b及炎性细胞因子白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、白细胞介素-12(interleukin-12, IL-12)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-a)的表达变化并观察心梗后miR-125b过表达对心功能的影响; 用免疫组织化学和免疫荧光方法检测小鼠心肌梗死后内源性HMGB1的释放, 并合成重组小鼠HMGB1(recombinant mouse high mobility group box-1 protein, rmHMGB1)蛋白进行体外实验研究。选择心梗后参与疾病病程调控的3种主要心脏组成细胞类型心肌细胞系H9C2、成纤维细胞系10T1/2以及原代巨噬细胞进行研究。构建miR-125b过表达腺病毒及对照腺病毒载体体外感染H9C2和10T1/2细胞及体内感染心梗后心脏组织; 合成miR-125b模拟物miR-125b mimic或对照模拟物control mimic转染小鼠原代巨噬细胞; 心梗后感染腺病毒的心脏组织予CD11b阳性细胞磁珠分选出巨噬细胞。通过qPCR和ELISA技术检测细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-a的表达水平。Western blot方法检测炎症反应核因子-κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPK)信号通路中P65、C-Jun氨基末端激酶(C-Jun N-terminal kinase, JNK)、P38以及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)的磷酸化水平。结果显示, 小鼠心梗早期心肌组织中miR-125b表达增加, 同一时期心肌组织检测到, 内源性HMGB1释放以及大量炎性细胞因子产生; miR-125b过表达促进心梗后巨噬细胞中生成炎性细胞因子; rmHMGB1重组蛋白可以诱导心肌H9C2细胞、成纤维细胞10T1/2以及原代巨噬细胞中炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α表达水平不同程度变化, 但是过表达miR-125b仅对rmHMGB1刺激原代巨噬细胞产生炎性细胞因子有选择性正向调控作用, 其原因可能与巨噬细胞中P65的磷酸化水平变化有关。该研究结果表明, miR-125b正调控心肌梗死后巨噬细胞中内源性HMGB1诱导的炎症反应, 对rmHMGB1诱导心肌细胞及成纤维细胞炎症反应无显著调控作用。