胶原酶I消化法体外分离培养奶牛乳腺上皮细胞
徐丹丹 孙志鹏 张 旭 刘东宇 许小楠 王 乐 陈 嘉 王建发 杨 彬 武 瑞*
黑龙江八一农垦大学动物科技学院, 大庆 163319
摘要 : 为获得纯净的奶牛乳腺上皮细胞, 该研究采用胶原酶I消化法, 在不添加外源激素及生长因子的条件下培养奶牛乳腺上皮细胞。采用差时消化与差速贴壁方法, 对奶牛乳腺上皮细胞进行纯化。采用Western blot方法检测细胞中β-酪蛋白(β-casein, CNS2)的水平。通过免疫荧光技术对细胞进行鉴定。结果显示, 纯化后的细胞呈现典型的“铺路石”或“鹅卵石”样。细胞角蛋白-18(cytokeratin-18, CK-18)反应呈阳性, 波形蛋白反应呈阴性。细胞传至15代冻存并复苏后生长状态依然良好。这提示, 胶原酶I消化法在不添加外源激素及生长因子的条件下可以获得奶牛乳腺上皮细胞, 以用于后续实验。
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