转录因子GATA3 mRNA 5′非翻译区内部核糖体进入位点的活性
陶义芬1 马 晶2 朱瑞宇2 段作营1 金 坚2* 李华钟1*
1工业生物技术教育部重点实验室, 江南大学药生物工程学院, 无锡 214122; 2江南大学药学院, 无锡 214122
摘要 : GATA3(GA-TA-binding protein-3)是锌指蛋白GATA家族成员之一, 在细胞的增殖和分化中起着重要的作用, GATA3在细胞中的异常表达也是导致众多肿瘤形成的原因。通过对GATA3 mRNA 5′非翻译区(untranslated region, UTR)进行分析, 发现其UTR长达557 bp并且具有复杂的二级结构。将GATA3 mRNA 5′ UTR克隆至双荧光素酶报告载体pRL-FL中, 瞬时转染至细胞中然后对细胞进行无血清培养后, 发现GATA3 mRNA 5′ UTR介导的翻译明显升高。将GATA3 mRNA 5′ UTR克隆至ΔpRL-FL载体上, 瞬时转染细胞后检测萤火虫荧光素酶的表达, 发现GATA3 mRNA 5′ UTR不具有隐含启动子, 进而确定GATA3 mRNA 5′ UTR具有内部核糖体进入位点(internal ribosome entry sites, IRES)元件; 进一步对GATA3 mRNA 5′ UTR进行序列截短分析, 发现GATA3 mRNA 5′ UTR中345~557 bp区间可能是抑制IRES活性的调控元件, 而95~344 bp区间则是IRES元件的主要活性中心调控域, 并且在不同的细胞系中GATA3 IRES元件的活性存在显著的差异。该研究结果表明, GATA3 mRNA的5′ UTR可参与GATA3的表达调控。
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