大鼠骨髓间充质干细胞培养、鉴定与成胰岛样β细胞诱导

摘要 : 为治疗糖尿病寻找新的胰岛β细胞替代物, 该研究对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)进行了体外分离培养、鉴定及成胰岛样β细胞诱导。应用全骨髓离心贴壁培养法分离大鼠BMSCs, 进行培养、传代、表面标志物检测, 利用DMSO和高糖环境对BMSCs进行胰岛样β细胞诱导。结果显示, 大鼠BMSCs体外培养细胞形态呈成纤维细胞样, 可以稳定传代; CD13、CD44和CD106表达呈阳性, CD49d呈阴性。在成胰诱导条件下, BMSCs可形成胰岛样圆形细胞团, 双硫腙染色呈棕红色, PDX1(pancreatic duodenal homeodomain 1)、CK19(cytokeratin 19)、巢蛋白、胰岛素免疫组化染色均呈阳性; 经RT-PCR检测发现, 成胰诱导后的BMSCs中表达胰岛素、PDX1和glucagon基因; 经q-PCR检测发现, 成胰诱导后的BMSCs中胰岛素mRNA水平是大鼠胰腺成体干细胞(pancreas adult stem cells, PASCs)的1.09倍(P>0.05); 同时, 有相应量的胰岛素合成。结果表明, 分离得到大鼠BMSCs体外生长稳定, 能转分化为胰岛样细胞, 该研究结果为糖尿病治疗提供了新的实验依据。