乳腺特异性表达催乳素基因载体的构建与检测

任艳萍^1,2 雷小灿^1,2 谢亮亮¹ 罗婵¹ 刘晓华¹ 石德顺^1* 李湘萍^1*

¹广西大学, 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室, 南宁 530004; ²遵义医学院基础医学院, 遵义 563003

摘要 : 催乳素(prolactin, PRL)可通过PRL-PRLR-JAK/STAT信号通路促进乳腺发育, 启动并维
持泌乳。为了探讨调控PRL基因表达对奶水牛产奶量的影响, 该研究构建了乳腺特异性表达PRL基因的核移植载体并检测了其有效性。首先, 利用RT-PCR方法克隆得到804 bp的水牛PRL基因编码区; 而后逐步采用酶切加连接方法, 依次将PRL基因、β-酪蛋白(β-casein, BCN)启动子和标记基因插入pIFN-BCNpolyA质粒中, 构建得到14.2 Kb的转PRL基因载体。将表达载体瞬时转染人Bcap-37细胞系, 经RT-PCR检测发现, 目的基因PRL可在该细胞系中表达。将该载体转入水牛胎儿成纤维细胞中, 通过核移植法获得了转PRL基因水牛克隆胚胎。该文结果表明, 所构建的PRL核移植载体可表达PRL基因, 并可用于生产转PRL基因克隆水牛胚胎。